Informație

13.5: Capcanele potențiale și cum să le evitați - Biologie

13.5: Capcanele potențiale și cum să le evitați - Biologie



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Recent, au fost publicate câteva lucrări care critică modelele de diversificare dependente de stat (Rabosky și Goldberg 2015, Maddison și FitzJohn (2015)). Aceste lucrări ridică critici de fond care sunt importante de abordat atunci când se aplică metodele descrise în acest capitol la datele empirice. În această secțiune voi încerca să descriu criticile și potențialele lor remedii.

Cea mai serioasă limitare a modelelor dependente de stat, așa cum sunt implementate în prezent, este aceea că iau în considerare doar un set relativ mic de modele posibile. În special, abordarea pe care o descriem mai sus compară două modele: în primul rând, un model în care ratele natalității și mortalității sunt constante și nu depind de starea personajului; și în al doilea rând, un model în care ratele natalității și mortalității depind doar de starea caracterului (Maddison et al. 2007). Dar există o altă posibilitate care ar putea fi (în general) mai comună decât oricare dintre modelele pe care le considerăm: ratele natalității și mortalității variază, dar într-un mod care nu depinde de caracterul particular pe care am ales să-l analizăm. Spun că acesta este probabil un model obișnuit, deoarece știm că ratele de naștere și deces variază enorm de la o descendență în arborele vieții (Alfaro et al. 2009) și mi se pare probabil că multe dintre ipotezele noastre despre personajele care ar putea contribui la această variație sunt, în acest moment, înjunghiuri în întuneric.

Această problemă este una normală pentru analizele statistice – la urma urmei, există întotdeauna alte modele în afara setului nostru de posibilități luate în considerare. Cu toate acestea, în acest caz, faptul că modelele de diversificare dependente de stat nu reușesc să ia în considerare posibilitatea prezentată mai sus provoacă o problemă foarte particulară – și particulară –: dacă aplicăm testele arborilor filogenetici empiric, chiar și cu date inventate, aproape găsesc întotdeauna rezultate semnificative statistic (Rabosky și Goldberg 2015). De exemplu, Rabosky și Goldberg (2015) au descoperit că există foarte adesea un „semnal” semnificativ statistic că numărul de litere dintr-un nume de specie este asociat în mod semnificativ cu ratele de speciație într-o serie de seturi de date empirice. Acest rezultat ar putea părea ridicol și derutant, deoarece nu există nicio modalitate ca lungimea numelui speciilor să fie asociată cu procesele de diversificare. Cu toate acestea, dacă ne întoarcem la modelul nostru alternativ de mai sus, atunci rezultatele au sens. Rabosky și Goldberg (2015) au simulat evoluția caracterelor pe arbori filogenetici reali, iar rezultatele lor nu sunt valabile atunci când arborii sunt simulați împreună cu personajele (de aceea rezultatele lui Rabosky și Goldberg (2015) nu reprezintă „erori de tip I” contra lucrarea lor, deoarece datele nu sunt simulate sub ipoteza nulă). Pe acești copaci adevărați, ratele de speciație și/sau extincție variază în funcție de clade. Dintre cele două modele pe care autorii le consideră, ambele sunt greșite; speciația și extincția sunt independente de caracter, dar nu constante în timp. Dintre cele două alternative, modelul dependent de stat tinde să se potrivească mai bine, deoarece, din punct de vedere statistic, este important ca modelul să surprindă o anumită variație a ratelor natalității și mortalității între clades. Chiar și un personaj aleatoriu va prelua o parte din această variație, astfel încât modelul alternativ tinde să se potrivească mai bine decât cel nul – chiar dacă, în acest caz, personajul nu are nimic de-a face cu diversificarea!

Din fericire, există o serie de moduri de a rezolva această problemă. În primul rând, se poate compara suportul statistic pentru modelul dependent de stat cu suportul pe care îl obținem pentru datele aleatorii. Datele aleatoare ar putea fi simulate pe arbore sau s-ar putea permuta sfaturile sau s-ar putea extrage date aleatoare dintr-o distribuție multinomială (Rabosky și Goldberg 2015). Se poate compara apoi, de exemplu, distribuția de ΔAeuCc scorurile obţinute din aceste permutări la ΔAeuCc pentru datele originale. Există și metode semiparametrice bazate pe permutări care au proprietăți statistice similare (Rabosky și Goldberg 2017). Alternativ, am putea lua în considerare în mod explicit posibilitatea ca un caracter nemăsurat să fie de fapt lucrul care influențează ratele de diversificare (Beaulieu și O’Meara 2016). Această din urmă abordare este cea mai elegantă, deoarece putem adăuga direct modelul descris în această secțiune la lista noastră de candidați (vezi Beaulieu și O’Meara 2016).

O critică mai generală a modelelor de diversificare dependente de stat a fost ridicată de Maddison și Fitzjohn (Maddison și FitzJohn 2015). Această lucrare a subliniat că rezultatele semnificative statistic pentru aceste teste pot fi determinate de un eveniment pe o singură ramură a unui copac și, prin urmare, pot fi nereplicate. Aceasta este o critică bună care se aplică la fel de bine unei game de metode comparative. Putem face față acestei critici, parțial, asigurându-ne că evenimentele pe care le testăm sunt replicate în datele noastre. Împreună, ambele critici pledează pentru un set mai puternic de abordări de adecvare a modelului în metodele comparative.


Centrul pentru Blog de strategie de vânzări

Intervievarea vânzătorilor este greu!

Selectarea, descoperirea și selectarea talentelor de top necesită multă practică și un proces de încredere. Pentru a profita mai bine de fiecare oportunitate de interviu de aur care iti vine in cale, trebuie sa cunosti capcanele comune - si apoi sa le eviti.

În ceea ce privește întrebările de interviu, cele mai bune sunt cele furnizate într-un instrument de talent științific validat, utilizat (spre sfârșitul procesului de selecție) de un Analist de Talent certificat. Următoarele cele mai bune întrebări la interviu sunt acelea pe care le puteți adresa fiecărui candidat pentru a obține o perspectivă asupra gândurilor, sentimentelor și comportamentelor sale pentru a determina dacă există suficiente dovezi de talent pentru a investi mai mult timp în ele.

Adesea lucrăm cu clienții noștri pentru a-i ajuta să-și îmbunătățească tehnicile de interviu și să devină mai buni în a-și muta oamenii potriviți în pâlnie. Cei care sunt cei mai buni în recrutarea și selectarea talentelor de top știu că o selecție puternică la început duce la un grup de candidați mult mai talentați de fiecare dată. Cei care nu se angajează la acest tip de practică consecventă tind să rămână blocați într-una dintre cele cinci capcane comune de interviu și adesea se găsesc dezamăgiți de performanța slabă a celor pe care i-au adus la bord.


Design prost al paginii

O parte majoră a unui site de comerț electronic este să ofere clienților un design atractiv al paginii. Ar trebui să fie curat, atrăgător și adecvat pentru produsele pe care le oferă. În cazul în care site-ul web al unei persoane nu funcționează la nivelul așteptărilor, proprietarul poate dori să arunce o privire asupra designului site-ului web al concurenței. Multe site-uri de comerț electronic reușesc folosind șabloane sau imitând șabloane găsite pe internet. Acestea sunt ușor de instalat sau creat. Imaginile utilizate pe site sunt extrem de importante. Furnizarea de imagini de înaltă calitate a produselor capătă o importanță deosebită, deoarece un site web de comerț electronic nu poate oferi clienților potențiali oportunitatea de a atinge fizic produsele. Un site de comerț electronic ar trebui să fie conceput astfel încât să nu-i copleșească pe cei care îl vizitează. Prea multe videoclipuri, sunet, grafică și multe altele pot fi prea mult pentru mulți oameni. Site-urile de comerț electronic de succes au un aspect concentrat și organizat.


Teleologie

Conceptele și procesele biologiei evoluționiste par să fie slab înțelese de elevii de liceu, membrii publicului și chiar studenții postliceali și absolvenții de biologie (Gregory 2009 Nehm și Schonfeld 2007, 2008). Una dintre dificultățile fundamentale în învățarea biologiei evoluționiste este că ființele umane tind să vadă lumea dintr-o perspectivă orientată spre scop și orientată spre obiective (Gregory 2009 Kelemen și Rosset 2009). Acest lucru se poate datora faptului că ne așteptăm ca alte ființe vii, procese și obiecte neînsuflețite să se comporte ca oamenii, cu acțiuni planificate și cu scop (Mead și Scott 2010a, b). Astfel, nu este surprinzător faptul că nu numai cursanții începători, ci și alți oameni tind să vadă evoluția ca pe un proces intenționat și direcționat (Catley et al. 2010 Kampourakis 2014 Kelemen 2012).

Gândirea teleologică este un mod de gândire în care obiectele sau procesele se comportă cu intenția subiacentă de a-și îndeplini scopul specific (Kelemen 1999a Rosenberg și McShea 2008). Această noțiune este puternică în mod specific la copii, totuși, persistă de-a lungul anilor de liceu și de universitate (Gregory 2009 Kelemen și Rosset 2009 Southerland și colab. 2001 Trommler și colab. 2018). În plus, în explicațiile teleologice, obiectele neînsuflețite sau părți ale ființelor vii (cum ar fi organele) sunt adesea atribuite în mod fals conștiinței și acțiunilor direcționate către un scop (Tamir și Zohar 1991).

Prejudecățile teleologice apar la elevi în timpul anilor preșcolari, când încearcă să înțeleagă multe aspecte ale lumii naturale. Copiii la această vârstă văd de obicei existența trăsăturilor organismului ca fiind utile pentru binele fizic al organismului, în timp ce văd proprietățile artefactelor ca existente în beneficiul agenților externi (Keil 2002 Kelemen 1999a). Mai mult, copiii de școală preșcolară și elementară atribuie atât organismele vii, cât și artefactele ca fiind „făcute pentru ceva” (Kelemen 1999b, c). În timp ce tinerii adolescenți pot înțelege conceptul complex de evoluție - că animalele se pot schimba substanțial într-o perioadă de timp - ei tind să aibă o părtinire teleologică din cauza explicației că animalele se schimbă în scopul de a se adapta (Evans 2001). În timpul școlii secundare, elevii se ceartă adesea teleologic despre existența trăsăturilor la animale. De exemplu, ei explică că caninii au nevoie de structuri precum ghearele și dinții pentru a-și prinde prada (Kampourakis și Zogza 2007).

Un motiv major pentru raționamentul teleologic în biologie este tendința generală a oamenilor de a gândi într-o manieră direcționată către un scop. Întrucât viața noastră de zi cu zi implică depășirea dificultăților, îndeplinirea sarcinilor și îndeplinirea nevoilor, suntem înclinați să privim multe situații cu o perspectivă orientată spre scop și, prin urmare, manifestăm o părtinire teleologică față de scopul sau funcția obiectelor sau proceselor (Gregory 2009). .

Teleologie și evoluție

Gândirea teleologică poate apărea sub diferite forme în contextul evoluției. Un exemplu este că procesele evolutive sunt văzute pe baza următoarelor trei idei (González Galli și Meinardi 2011): (1) Procesul de evoluție urmărește să creeze anumite linii sau specii (în special oameni). (2) Procesul de evoluție are ca scop asigurarea supraviețuirii speciilor. (3) Variațiile individuale apar pentru a satisface nevoile impuse speciilor de mediu și pentru a depăși provocările de supraviețuire. Un alt mod în care gândirea teleologică poate deveni evidentă este atunci când cursanții răspund la întrebări evolutive care conțin cuvântul „de ce” cu răspunsuri care reflectă mai mult întrebările „În ce scop?” sau „Pentru ce este?” în loc de sensul științific exact al „Care este cauza?” (Kelemen 1999a). Aceste interpretări pot implica faptul că elevii presupun că procesele biologice urmează o funcție în loc să fie rezultatul unui set complex de factori de influență.

Diferite credințe și concepte în evoluție care pot forma concepții greșite greu de depășit se bazează pe idei teleologice (Kampourakis 2014). Deoarece unii studenți văd schimbarea evolutivă ca un mijloc de a depăși provocările de supraviețuire, ei presupun că evoluția este o dezvoltare de o complexitate crescândă. Depășind în mod intenționat provocările, speciile devin mai complexe și, prin urmare, sunt „mai (foarte) dezvoltate” decât alte specii. Prin urmare, noțiunea de a vedea sistemul taxonomic ca o ordine crescândă a complexității ar putea fi o consecință a gândirii teleologice, așa cum a propus Kummer și colab. (2016). Pe parcursul acestei lucrări, vom prezenta această idee mai detaliat.

Arborele evolutiv ca reprezentare a evoluției

Un element important în învățarea și comunicarea despre biologie este reprezentarea grafică (Wiley et al. 2017). În cazul biologiei evoluționiste, arborii filogenetici sau evoluționari sunt un instrument indispensabil pentru comunicare (Baum și Smith 2013). Arborii evolutivi sunt ipoteze schematice despre relațiile relative dintre taxoni și sunt văzuți ca cea mai directă formă de reprezentare a proceselor macro-evolutive (Baum et al. 2005). Ele nu numai că arată rezultatele evoluției prin afișarea relațiilor relative ale speciilor selectate, dar acționează și ca un instrument de investigare a proceselor evolutive (Baum și Smith 2013). Prin urmare, capacitatea de a lucra cu arbori evolutivi este văzută ca o condiție prealabilă pentru înțelegerea pe deplin a conceptelor și proceselor de biologie evolutivă (Catley et al. 2012 Meisel 2010).

Aspectele citirii, interpretării și utilizării arborilor evoluționari sunt incluse în termenul „citire în arbore”, care, împreună cu aspectele de creare a unei ipoteze pentru un arbore evolutiv din date date, se numește gândire arboreală (Baum și Smith 2013 Halverson). 2011). În această lucrare, ne vom concentra asupra aspectului citirii în arbore. Abilitatea de a citi arbori evolutivi constă într-un număr de abilități diferite, de la cunoașterea elementelor diagramei, cum ar fi nodurile interne, supra-citirea și interpretarea de noi trăsături (apomorfii), evaluarea relațiilor relative ale speciilor și formarea de grupuri monofiletice pentru a compara și contrastează diferiți arbori evolutivi (Halverson 2011 Novick și Catley 2016 Schramm et al. 2019).

În ciuda relevanței gândirii în arbori, numeroase studii arată că studenții se luptă cu aceste tipuri de reprezentări și că lucrul cu arbori evolutivi este o problemă la toate nivelurile educaționale (Baum et al. 2005 Blacquiere și Hoese 2016 Bokor et al. 2014 Kummer et al. 2016 Meir et al. 2007). Acest lucru poate fi explicat, deoarece numeroși factori cunoscuți pot afecta dificultatea citirii arborilor evolutivi. Citirea diagramelor de arbore evolutiv este o sarcină complexă și este influențată de factori precum cunoașterea conceptelor evolutive (MacDonald și Wiley 2012) și cunoștințele anterioare despre morfologia speciilor (Novick și Catley 2014). Pe lângă factorii legați de elevi, factorii din partea diagramei pot afecta dificultatea de citire a unui copac (de exemplu, Catley și colab. 2012 MacDonald și Wiley 2012 Novick și colab. 2010). Mai mult, au fost raportate numeroase concepții greșite persistente și larg răspândite, cum ar fi ideea că liniile drepte, neîntrerupte nu reprezintă o schimbare evolutivă sau că ordinea speciilor prezentate reprezintă relația lor relativă (spre deosebire de modelul de ramificare) (de exemplu, Gregory 2008 Meisel). 2010).

Deoarece gândirea teleologică este văzută ca unul dintre obstacolele majore în predarea biologiei evoluționiste (Barnes et al. 2017 González Galli și Meinardi 2011), educatorii și cercetătorii au încercat să examineze ceea ce îi determină pe studenți să adopte sau să renunțe la raționamentul teleologic și cum să predea biologia evolutivă în cel mai bun mod pentru a favoriza interpretările științifice ale conceptelor evolutive.

Așa cum gândirea teleologică este văzută ca o problemă centrală în învățarea despre biologia evoluționistă, abilitatea de a citi copacii evoluționari este văzută ca o condiție prealabilă crucială pentru a înțelege pe deplin teoria evoluției. În plus, citirea în copac este văzută ca o abilitate majoră în biologia evolutivă modernă, dar studiile arată că studenții de la toate nivelurile educaționale prezintă deficite majore în aceste abilități (Catley et al. 2012 Gregory 2008 Kummer et al. 2016 Omland 2014). În această lucrare, dorim să examinăm rezultatele cercetărilor în curs și ale considerentelor teoretice privind citirea în copac, cu accent pe identificarea și prezentarea capcanelor teleologice tipice în predare ca parte a biologiei evoluționiste. Ulterior, dorim să prezentăm idei despre modul în care arborii evoluționari pot fi utilizați într-un mod constructiv pentru a preda citirea în arbore în mod științific și pentru a inspira activități care pot ajuta studenții să implementeze în mod corespunzător raționamentul teleologic.


Cuprins

Pregătirea bibliotecii Edit

Pașii generali pentru a pregăti o bibliotecă de ADN complementar (ADNc) pentru secvențiere sunt descriși mai jos, dar adesea variază între platforme. [8] [3] [9]

  1. Izolarea ARN:ARN-ul este izolat din țesut și amestecat cu dezoxiribonuclează (DNază). DNaza reduce cantitatea de ADN genomic. Cantitatea de degradare a ARN este verificată cu gel și electroforeză capilară și este utilizată pentru a atribui un număr de integritate ARN probei. Această calitate ARN și cantitatea totală de ARN inițial sunt luate în considerare în timpul etapelor ulterioare de pregătire, secvențiere și analiză a bibliotecii.
  1. Selecția/epuizarea ARN: Pentru a analiza semnalele de interes, ARN-ul izolat poate fi fie păstrat ca atare, filtrat pentru ARN cu cozi 3' poliadenilate (poli(A)) pentru a include numai ARNm, sărăcit de ARN ribozomal (ARNr) și/sau filtrat pentru ARN care leagă secvențe specifice (Metode de selecție și epuizare a ARN-ului tabel, mai jos). ARN-ul cu cozi 3' poli(A) este compus în principal din secvenţe de codificare mature, procesate. Selecția poli(A) se realizează prin amestecarea ARN cu oligomeri poli(T) atașați covalent la un substrat, de obicei granule magnetice. [10][11] Selecția poli(A) are limitări importante în detectarea biotipului ARN. Multe biotipuri de ARN nu sunt poliadenilate, inclusiv multe transcrieri de ARN necodificatoare și proteine ​​​​histone-miez, sau sunt reglementate prin lungimea cozii poli(A) (de exemplu, citokinele) și, prin urmare, ar putea să nu fie detectate după selecția poli(A). [12] În plus, selecția poli(A) poate crește părtinirea 3’, în special cu ARN de calitate inferioară. [13][14] Aceste limitări pot fi evitate cu depleția ribozomală, eliminând ARNr care reprezintă de obicei peste 90% din ARN dintr-o celulă. Atât pașii de îmbogățire poli(A), cât și de epuizare ribozomală sunt intensive în muncă și ar putea introduce părtiniri, așa că au fost dezvoltate abordări mai simple pentru a omite acești pași. [15] Țintele mici de ARN, cum ar fi miARN, pot fi izolate în continuare prin selectarea dimensiunii cu geluri de excludere, margele magnetice sau truse comerciale.
  1. Sinteza cADN: ARN-ul este transcris invers în ADNc, deoarece ADN-ul este mai stabil și pentru a permite amplificarea (care utilizează ADN polimeraze) și pentru a folosi o tehnologie de secvențiere a ADN-ului mai matură. Amplificarea ulterioară transcripției inverse are ca rezultat pierderea eșantionării, care poate fi evitată prin etichetare chimică sau secvențiere cu o singură moleculă. Fragmentarea și selecția dimensiunii sunt efectuate pentru a purifica secvențele care au lungimea adecvată pentru mașina de secvențiere. ARN-ul, cADN-ul sau ambele sunt fragmentate cu enzime, sonicare sau nebulizatoare. Fragmentarea ARN reduce biasul 5’ a transcripției inverse amorsate aleatoriu și influența situsurilor de legare a primerului, [11] cu dezavantajul că capetele 5’ și 3’ sunt convertite în ADN mai puțin eficient. Fragmentarea este urmată de selectarea dimensiunii, unde fie secvențele mici sunt eliminate, fie sunt selectate o gamă restrânsă de lungimi de secvență. Deoarece ARN-urile mici precum miARN-urile se pierd, acestea sunt analizate independent.ADNc-ul pentru fiecare experiment poate fi indexat cu un cod de bare hexamer sau octamer, astfel încât aceste experimente să poată fi reunite într-o singură bandă pentru secvențierea multiplexată.

Secvențierea ADN complementară (cDNA-Seq) Edit

Biblioteca de ADNc derivată din biotipuri de ARN este apoi secvențiată într-un format care poate fi citit de computer. Există multe tehnologii de secvențiere cu randament ridicat pentru secvențierea ADNc, inclusiv platforme dezvoltate de Illumina, Thermo Fisher, BGI/MGI, PacBio și Oxford Nanopore Technologies. [16] Pentru secvențierea cu citire scurtă Illumina, o tehnologie comună pentru secvențierea ADNc, adaptoarele sunt legate de ADNc, ADN-ul este atașat la o celulă de flux, clusterele sunt generate prin cicluri de amplificare și denaturare a punții, iar secvența după sinteză este efectuate în cicluri de sinteză a catenelor complementare și excitație laser a bazelor cu terminatoare reversibile. Alegerea platformei de secvențiere și parametrii sunt ghidate de designul experimental și costul. Considerentele obișnuite ale designului experimental includ decizia privind lungimea secvențierii, adâncimea secvențierii, utilizarea secvențierii unice versus pereche, numărul de replici, multiplexarea, randomizarea și intensificarea. [17]

Secvențierea ARN-ului mic/ARN necodant Edit

Când se secvențiază ARN altul decât ARNm, preparatul din bibliotecă este modificat. ARN-ul celular este selectat pe baza intervalului de dimensiuni dorit. Pentru ținte mici de ARN, cum ar fi miARN, ARN-ul este izolat prin selecția dimensiunii. Acest lucru poate fi realizat cu un gel de excludere a mărimii, prin margele magnetice de selectare a mărimii sau cu un kit dezvoltat comercial. Odată izolați, linkerii sunt adăugați la capătul 3’ și 5’ apoi purificați. Etapa finală este generarea de cADN prin transcripție inversă.

Secvențierea directă a ARN Edit

Deoarece conversia ARN-ului în cADN, ligarea, amplificarea și alte manipulări ale eșantioanelor s-au dovedit a introduce distorsiuni și artefacte care pot interfera atât cu caracterizarea adecvată, cât și cu cuantificarea transcrierilor, [18] secvențierea directă a ARN cu o singură moleculă a fost explorată de companii, inclusiv Helicos. (falimentar), Oxford Nanopore Technologies, [19] și alții. Această tehnologie secvențiază moleculele de ARN direct într-o manieră masiv paralelă.

Secvențierea ARN în timp real cu o singură moleculă Edit

ARN-Seq direct cu o singură moleculă paralelă masiv a fost explorată ca o alternativă la ARN-Seq tradițional, în care conversia ARN-la-ADNc, ligarea, amplificarea și alte etape de manipulare a probei pot introduce distorsiuni și artefacte. [20] Platformele tehnologice care efectuează ARN-Seq cu o singură moleculă în timp real includ secvențierea Nanopore Oxford Nanopore Technologies (ONT), [19] PacBio IsoSeq și Helicos (falimentar). Secvențierea ARN-ului în forma sa nativă păstrează modificări precum metilarea, permițându-le să fie investigate direct și simultan. [19] Un alt beneficiu al ARN-Seq cu o singură moleculă este că transcrierile pot fi acoperite pe toată lungimea, permițând detectarea și cuantificarea izoformelor cu încredere mai mare în comparație cu secvențierea cu citire scurtă. În mod tradițional, metodele ARN-Seq cu o singură moleculă au rate de eroare mai mari în comparație cu secvențierea cu citire scurtă, dar metode mai noi, cum ar fi ONT direct ARN-Seq limitează erorile prin evitarea fragmentării și conversiei ADNc. Utilizările recente ale ARN-Seq direct ONT pentru expresia diferențială în populațiile de celule umane au demonstrat că această tehnologie poate depăși multe limitări ale secvențierii ADNc scurte și lungi. [21]

Secvențierea ARN unicelulare (scRNA-Seq) Edit

Metodele standard, cum ar fi microarrays și analiza ARN-Seq standard în vrac analizează expresia ARN-urilor din populații mari de celule. În populațiile de celule mixte, aceste măsurători pot ascunde diferențele critice dintre celulele individuale din cadrul acestor populații. [22] [23]

Secvențierea ARN cu o singură celulă (scRNA-Seq) oferă profilele de expresie ale celulelor individuale. Deși nu este posibil să se obțină informații complete despre fiecare ARN exprimat de fiecare celulă, din cauza cantității mici de material disponibil, modelele de expresie a genelor pot fi identificate prin analize de grupare a genelor. Acest lucru poate descoperi existența unor tipuri de celule rare într-o populație de celule care este posibil să nu fi fost văzute niciodată înainte. De exemplu, celule rare specializate din plămân numite ionocite pulmonare care exprimă regulatorul de conductanță transmembranară a fibrozei chistice au fost identificate în 2018 de două grupuri care efectuează scRNA-Seq pe epiteliul căilor respiratorii pulmonare. [24] [25]

Proceduri experimentale Edit

Protocoalele actuale scRNA-Seq implică următorii pași: izolarea unei singure celule și a ARN-ului, transcrierea inversă (RT), amplificarea, generarea bibliotecii și secvențierea. Celulele unice sunt fie separate mecanic în microgodeuri (de exemplu, BD Rhapsody, Takara ICELL8, Vycap Puncher Platform sau CellMicrosystems CellRaft) fie încapsulate în picături (de exemplu, 10x Genomics Chromium, Illumina Bio-Rad ddSEQ, 1CellBio InDrop Nadia). [26] Celulele unice sunt etichetate prin adăugarea de margele cu oligonucleotide cu coduri de bare, atât celulele cât și margelele sunt furnizate în cantități limitate, astfel încât co-ocuparea cu mai multe celule și margele este un eveniment foarte rar. Odată ce transcrierea inversă este completă, ADNc-urile din multe celule pot fi amestecate împreună pentru secvențierea transcrierilor dintr-o anumită celulă sunt identificate prin codul de bare unic al fiecărei celule. [27] [28] Identificatorul molecular unic (UMI) poate fi atașat la secvențele țintă mARN/cDNA pentru a ajuta la identificarea artefactelor în timpul pregătirii bibliotecii. [29]

Provocările pentru scRNA-Seq includ păstrarea abundenței relative inițiale a ARNm într-o celulă și identificarea transcriptelor rare. [30] Etapa de transcripție inversă este critică, deoarece eficiența reacției RT determină cât de mult din populația de ARN a celulei va fi analizată în cele din urmă de către secvențior. Procesivitatea transcriptazelor inverse și strategiile de amorsare utilizate pot afecta producția de ADNc de lungime completă și generarea de biblioteci părtinitoare către capătul 3’ sau 5’ al genelor.

În etapa de amplificare, fie PCR, fie transcripția in vitro (IVT) este utilizată în prezent pentru a amplifica cADN. Unul dintre avantajele metodelor bazate pe PCR este capacitatea de a genera cADN de lungime completă. Cu toate acestea, eficiența PCR diferită pe anumite secvențe (de exemplu, conținutul GC și structura snapback) poate fi, de asemenea, amplificată exponențial, producând biblioteci cu acoperire neuniformă. Pe de altă parte, în timp ce bibliotecile generate de IVT pot evita distorsiunea secvenței induse de PCR, secvențele specifice pot fi transcrise ineficient, provocând astfel abandonarea secvenței sau generând secvențe incomplete. [31] [22] Au fost publicate mai multe protocoale scRNA-Seq: Tang și colab., [32] STRT, [33] SMART-seq, [34] CEL-seq, [35] RAGE-seq, [36] Quartz -seq [37] și C1-CAGE. [38] Aceste protocoale diferă în ceea ce privește strategiile pentru transcrierea inversă, sinteza și amplificarea ADNc și posibilitatea de a găzdui coduri de bare specifice secvenței (adică UMI) sau capacitatea de a procesa probe reunite. [39]

În 2017, au fost introduse două abordări pentru a măsura simultan ARNm unicelular și expresia proteinei prin anticorpi marcați cu oligonucleotide, cunoscuți ca REAP-seq, [40] și CITE-seq. [41]

Editare aplicații

scRNA-Seq devine utilizat pe scară largă în disciplinele biologice, inclusiv Dezvoltare, Neurologie, [42] Oncologie, [43] [44] [45] Boală autoimună [46] și Boli infecțioase. [47]

scRNA-Seq a oferit o perspectivă considerabilă asupra dezvoltării embrionilor și a organismelor, inclusiv a viermelui Caenorhabditis elegans, [48] și planaria regenerativă Schmidtea mediterranea. [49] [50] Primele animale vertebrate care au fost cartografiate în acest fel au fost peștii zebră [51] [52] și Xenopus laevis. [53] În fiecare caz, au fost studiate mai multe etape ale embrionului, permițând cartografierea întregului proces de dezvoltare celulă cu celulă. [8] Știința a recunoscut aceste progrese drept Descoperirea anului 2018. [54]

Considerații experimentale Edit

La proiectarea și efectuarea experimentelor ARN-Seq sunt luați în considerare o varietate de parametri:

  • Specificitatea tisulară: Expresia genelor variază în interiorul și între țesuturi, iar ARN-Seq măsoară acest amestec de tipuri de celule. Acest lucru poate face dificilă izolarea mecanismului biologic de interes. Secvențierea unei singure celule poate fi utilizată pentru a studia fiecare celulă în mod individual, atenuând această problemă.
  • Dependenta de timp: Expresia genei se schimbă în timp, iar ARN-Seq ia doar o instantanee. Pot fi efectuate experimente de curs de timp pentru a observa schimbările în transcriptom.
  • Acoperire (cunoscută și ca adâncime): ARN-ul adăpostește aceleași mutații observate în ADN, iar detectarea necesită o acoperire mai profundă. Cu o acoperire suficient de mare, ARN-Seq poate fi utilizat pentru a estima expresia fiecărei alele. Acest lucru poate oferi o perspectivă asupra fenomenelor precum efectele de amprentare sau cis-reglementare. Profunzimea de secvențiere necesară pentru aplicații specifice poate fi extrapolată dintr-un experiment pilot. [55]
  • Artefacte de generare a datelor (cunoscute și ca variație tehnică): Reactivii (de exemplu, trusa de pregătire a bibliotecii), personalul implicat și tipul de secvenționar (de exemplu, Illumina, Pacific Biosciences) pot duce la artefacte tehnice care ar putea fi interpretate greșit ca rezultate semnificative. Ca și în cazul oricărui experiment științific, este prudent să se efectueze ARN-Seq într-un cadru bine controlat. Dacă acest lucru nu este posibil sau studiul este o meta-analiză, o altă soluție este detectarea artefactelor tehnice prin deducerea variabilelor latente (de obicei analiza componentelor principale sau analiza factorială) și corectarea ulterior pentru aceste variabile. [56]
  • Management de date: Un singur experiment ARN-Seq la oameni este de obicei de 1-5 Gb (comprimat) sau mai mult atunci când includ fișiere intermediare. [57] Acest volum mare de date poate pune probleme de stocare. O soluție este comprimarea datelor folosind scheme de calcul multifuncționale (de exemplu, gzip) sau scheme specifice genomicei. Acesta din urmă se poate baza pe secvențe de referință sau de novo. O altă soluție este efectuarea de experimente cu microarray, care pot fi suficiente pentru lucrări bazate pe ipoteze sau studii de replicare (spre deosebire de cercetarea exploratorie).

Asamblarea transcriptomului Edit

Sunt utilizate două metode pentru a atribui citirile de secvențe brute caracteristicilor genomice (adică, asamblarea transcriptomului):

  • De novo: Această abordare nu necesită un genom de referință pentru a reconstrui transcriptomul și este utilizată de obicei dacă genomul este necunoscut, incomplet sau modificat substanțial în comparație cu referința. [58] Provocările atunci când se utilizează citiri scurte pentru asamblarea de novo includ 1) determinarea citirilor care trebuie unite împreună în secvențe contigue (contigs), 2) robustețea la erorile de secvențiere și alte artefacte și 3) eficiența computațională. Algoritmul principal utilizat pentru asamblarea de novo a trecut de la graficele de suprapunere, care identifică toate suprapunerile în perechi între citiri, la graficele de Bruijn, care împart citirile în secvențe de lungime k și restrâng toți k-merii într-un tabel hash. [59] Graficele de suprapunere au fost utilizate cu secvențierea Sanger, dar nu se scala bine la milioanele de citiri generate cu ARN-Seq. Exemple de asamblatori care folosesc grafice de Bruijn sunt Trinity, [58] Oases [60] (derivat din asamblatorul genomului Velvet[61] ), Bridger [62] și rnaSPAdes. [63] Secvențierea de sfârșit pereche și de citire lungă a aceluiași eșantion poate atenua deficitele în secvențierea de citire scurtă, servind ca șablon sau schelet. Măsurile pentru a evalua calitatea unui ansamblu de novo includ lungimea mediană a contigului, numărul de contig și N50. [64]
  • Genom ghidat: Această abordare se bazează pe aceleași metode utilizate pentru alinierea ADN-ului, cu complexitatea suplimentară a alinierii citirilor care acoperă porțiuni necontinue ale genomului de referință. [65] Aceste citiri necontinue sunt rezultatul secvențierii transcrierilor îmbinate (vezi figura). În mod obișnuit, algoritmii de aliniere au doi pași: 1) aliniază porțiuni scurte ale citirii (adică, seminează genomul) și 2) utilizează programarea dinamică pentru a găsi o aliniere optimă, uneori în combinație cu adnotări cunoscute. Instrumentele software care folosesc alinierea ghidată de genom includ Bowtie, [66] TopHat (care se bazează pe rezultatele BowTie pentru a alinia joncțiunile de îmbinare), [67][68] Subread, [69] STAR, [65] HISAT2, [70] și GMAP . [71] Rezultatele instrumentelor de aliniere (cartografiere) ghidată de genom pot fi utilizate în continuare de instrumente precum Cufflinks [68] sau StringTie [72] pentru a reconstrui secvențe de transcriere adiacente (adică, un fișier FASTA). Calitatea unui ansamblu ghidat de genom poate fi măsurată atât cu 1) metrici de ansamblu de novo (de exemplu, N50) cât și 2) comparații cu transcrierea cunoscută, joncțiunea de îmbinare, genom și secvențe de proteine ​​folosind precizie, rechemare, sau combinația lor (de exemplu, scor F1). [64] În plus, in Silicon evaluarea ar putea fi efectuată folosind citiri simulate. [73][74]

O notă despre calitatea asamblarii: Consensul actual este că 1) calitatea ansamblului poate varia în funcție de metrica utilizată, 2) instrumentele de asamblare care au obținut un scor bun la o specie nu funcționează neapărat bine la celelalte specii și 3) combinarea diferitelor abordări ar putea fi cea mai fiabilă. [75] [76] [77]

Cuantificarea expresiei genelor Edit

Expresia este cuantificată pentru a studia modificările celulare ca răspuns la stimuli externi, diferențele dintre stările sănătoase și cele bolnave și alte întrebări de cercetare. Nivelurile de transcripție sunt adesea folosite ca proxy pentru abundența proteinelor, dar acestea nu sunt adesea echivalente din cauza evenimentelor posttranscripționale, cum ar fi interferența ARN și degradarea mediată de nonsens. [78]

Expresia este cuantificată prin numărarea numărului de citiri care au fost mapate la fiecare locus în etapa de asamblare a transcriptomului. Expresia poate fi cuantificată pentru exoni sau gene folosind contigs sau adnotări de referință. [8] Aceste numărători de citire ARN-Seq observate au fost validate în mod solid împotriva tehnologiilor mai vechi, inclusiv microarrays de expresie și qPCR. [55] [79] Instrumentele care cuantifică numărul sunt HTSeq, [80] FeatureCounts, [81] Rcount, [82] maxcounts, [83] FIXSEQ, [84] și Cuffquant. Aceste instrumente determină numărătoarele de citire din datele ARN-Seq aliniate, dar numărările fără aliniere pot fi obținute și cu Sailfish [85] și Kallisto. [86] Numărările citite sunt apoi convertite în valori adecvate pentru testarea ipotezelor, regresii și alte analize. Parametrii acestei conversii sunt:

  • Adâncime/acoperire secvențiere: Deși adâncimea este pre-specificată atunci când se efectuează mai multe experimente ARN-Seq, aceasta va varia în continuare foarte mult între experimente. [87] Prin urmare, numărul total de citiri generate într-un singur experiment este de obicei normalizat prin conversia numărărilor în fragmente, citiri sau numărători per milion de citiri mapate (FPM, RPM sau CPM). Diferența dintre RPM și FPM a fost derivată din punct de vedere istoric în timpul evoluției de la secvențierea cu un singur capăt a fragmentelor la secvențierea cu un capăt pereche. În secvențierea cu un singur capăt, există o singură citire per fragment (adică, RPM = FPM). În secvențierea cu sfârșitul pereche, există două citiri per fragment (adică, RPM = 2 x FPM). Adâncimea de secvențiere este uneori denumită dimensiunea bibliotecii, numărul de molecule intermediare de ADNc din experiment.
  • Lungimea genei: Genele mai lungi vor avea mai multe fragmente/citiri/numărări decât genele mai scurte dacă expresia transcriptului este aceeași. Aceasta este ajustată prin împărțirea FPM la lungimea unei caracteristici (care poate fi o genă, o transcriere sau un exon), rezultând fragmentele metrice pe kilobază de caracteristică per milion de citiri mapate (FPKM). [88] Când se analizează grupuri de caracteristici din eșantioane, FPKM este convertit în transcrieri per milion (TPM) prin împărțirea fiecărui FPKM la suma FPKM dintr-un eșantion. [89][90][91]
  • Ieșire totală de ARN eșantion: Deoarece din fiecare probă se extrage aceeași cantitate de ARN, probele cu mai mult ARN total vor avea mai puțin ARN per genă. Aceste gene par să aibă expresia scăzută, ducând la rezultate false pozitive în analizele din aval. [87] Strategiile de normalizare, inclusiv cuantila, DESeq2, TMM și raportul median încearcă să țină seama de această diferență prin compararea unui set de gene exprimate nediferențial între mostre și scalarea în consecință. [92]
  • Varianta pentru expresia fiecărei gene: este modelat pentru a ține cont de eroarea de eșantionare (importantă pentru genele cu un număr scăzut de citire), pentru a crește puterea și a reduce valorile false pozitive. Varianța poate fi estimată ca o distribuție normală, Poisson sau binomială negativă [93][94][95] și este frecvent descompusă în varianță tehnică și biologică.

Spike-in-uri pentru cuantificarea absolută și detectarea efectelor la nivelul genomului Edit

Spike-in-urile de ARN sunt mostre de ARN la concentrații cunoscute care pot fi utilizate ca standarde de aur în proiectarea experimentală și în timpul analizelor din aval pentru cuantificarea absolută și detectarea efectelor la nivelul genomului.

  • Cuantificare absolută: Cuantificarea absolută a expresiei genelor nu este posibilă cu majoritatea experimentelor ARN-Seq, care cuantifică expresia în raport cu toate transcrierile. Este posibil prin efectuarea ARN-Seq cu spike-ins, mostre de ARN la concentrații cunoscute. După secvențiere, numărările de citire ale secvențelor spike-in sunt utilizate pentru a determina relația dintre numărul de citire a fiecărei gene și cantitățile absolute de fragmente biologice [11][96] Într-un exemplu, această tehnică a fost utilizată în Xenopus tropicalis embrioni pentru a determina cinetica transcripției. [97]
  • Detectarea efectelor la nivelul genomului: Modificările regulatorilor globali, inclusiv remodelatorii cromatinei, factorii de transcripție (de exemplu, MYC), complecșii de acetiltransferază și poziționarea nucleozomilor nu sunt congruente cu ipotezele de normalizare, iar controalele spike-in pot oferi o interpretare precisă. [98][99]

Expresie diferențială Edit

Cea mai simplă, dar adesea cea mai puternică utilizare a ARN-Seq este găsirea diferențelor în expresia genelor între două sau mai multe condiții (de exemplu., tratat vs netratat) acest proces se numește expresie diferențială. Rezultatele sunt adesea denumite gene exprimate diferențial (DEG) și aceste gene pot fi reglate în sus sau în jos (adică, mai mare sau mai mică în condiția dobânzii). Există multe instrumente care efectuează expresia diferențială. Cele mai multe sunt rulate în R, Python sau linia de comandă Unix. Instrumentele utilizate în mod obișnuit includ DESeq, [94] edgeR, [95] și voom+limma, [93] [100] toate fiind disponibile prin R/Bioconductor. [101] [102] Acestea sunt considerațiile comune atunci când se efectuează expresia diferențială:

  • Intrări: Intrările de expresie diferențială includ (1) o matrice de expresie ARN-Seq (M gene x N eșantioane) și (2) o matrice de proiectare care conține condiții experimentale pentru N eșantioane. Cea mai simplă matrice de proiectare conține o coloană, corespunzătoare etichetelor pentru condiția testată. Alte covariate (denumite și factori, caracteristici, etichete sau parametri) pot include efecte de lot, artefacte cunoscute și orice metadate care ar putea confunda sau media expresia genelor. În plus față de covariatele cunoscute, covariatele necunoscute pot fi estimate și prin abordări nesupravegheate de învățare automată, inclusiv analizele componentei principale, variabilelor surogat [103] și PEER [56]. Analizele variabile ascunse sunt adesea folosite pentru datele ARN-Seq ale țesutului uman, care au de obicei artefacte suplimentare care nu sunt capturate în metadate (de exemplu., timp ischemic, aprovizionare din mai multe instituții, trăsături clinice care stau la baza, colectarea de date de-a lungul multor ani cu mult personal).
  • Metode: Cele mai multe instrumente folosesc statistici de regresie sau non-parametrice pentru a identifica genele exprimate diferențial și se bazează fie pe numerele de citire mapate la un genom de referință (DESeq2, limma, edgeR), fie se bazează pe numerele de citire derivate din cuantificarea fără aliniere (sleuth, [104). ] Cuffdiff, [105] Ballgown [106] ). [107] În urma regresiei, cele mai multe instrumente utilizează ajustări ale valorii p fie ratei de eroare la nivel de familie (FWER), fie ratei de descoperire falsă (FDR) pentru a ține cont de mai multe ipoteze (în studiile pe oameni,

20.000 de gene care codifică proteine ​​sau

Analizele din aval pentru o listă de gene exprimate diferențial vin în două variante, validând observațiile și făcând inferențe biologice. Datorită capcanelor exprimării diferențiale și ARN-Seq, observațiile importante sunt replicate cu (1) o metodă ortogonală în aceleași probe (cum ar fi PCR în timp real) sau (2) un alt experiment, uneori preînregistrat, într-o nouă cohortă . Acesta din urmă ajută la asigurarea generalizării și poate fi de obicei urmat de o meta-analiză a tuturor cohortelor reunite. Cea mai comună metodă pentru obținerea unei înțelegeri biologice de nivel superior a rezultatelor este analiza de îmbogățire a setului de gene, deși uneori sunt folosite abordări genetice candidate. Îmbogățirea setului de gene determină dacă suprapunerea dintre două seturi de gene este semnificativă statistic, în acest caz suprapunerea dintre genele exprimate diferențial și seturile de gene din căi/baze de date cunoscute (de exemplu., Gene Ontology, KEGG, Human Phenotype Ontology) sau din analize complementare în aceleași date (cum ar fi rețelele de co-expresie). Instrumentele comune pentru îmbogățirea setului de gene includ interfețele web (de exemplu., ENRICHR, g:profiler, WEBGESTALT) [114] și pachete software. Când se evaluează rezultatele îmbogățirii, o euristică este de a căuta mai întâi îmbogățirea biologiei cunoscute ca o verificare a stării de spirit și apoi de a extinde domeniul de aplicare pentru a căuta o biologie nouă.

Îmbinare alternativă Editare

Splicing-ul ARN este parte integrantă a eucariotelor și contribuie în mod semnificativ la reglarea și diversitatea proteinelor, care apar în >90% din genele umane. [115] Există mai multe moduri alternative de îmbinare: sărirea exonilor (cel mai comun mod de îmbinare la om și la eucariote superioare), exoni care se exclud reciproc, site-uri alternative donatoare sau acceptoare, retenție de intron (cel mai comun mod de îmbinare la plante, ciuperci și protozoare), site alternativ de începere a transcripției (promotorul) și poliadenilare alternativă. [115] Un obiectiv al ARN-Seq este de a identifica evenimente alternative de îmbinare și de a testa dacă diferă între condiții. Secvențierea de citire lungă captează transcrierea completă și astfel minimizează multe probleme în estimarea abundenței izoformelor, cum ar fi maparea ambiguă a citirii. Pentru ARN-Seq cu citire scurtă, există mai multe metode de detectare a îmbinării alternative care pot fi clasificate în trei grupuri principale: [116] [89] [117]

  • Bazat pe număr (de asemenea, bazat pe evenimente, îmbinare diferențială): estimarea retenției exonilor. Exemple sunt DEXSeq, [118] MATS, [119] și SeqGSEA. [120]
  • Bazat pe izoforme (de asemenea, module cu mai multe citiri, expresie diferențială a izoformelor): estimați mai întâi abundența izoformelor și apoi abundența relativă între condiții. Exemple sunt Cufflinks 2 [121] și DiffSplice. [122]
  • Excizia intronului pe baza: calculați îmbinarea alternativă folosind citiri separate. Exemple sunt MAJIQ [123] și Leafcutter. [117]

Instrumentele de expresie diferențială a genelor pot fi, de asemenea, utilizate pentru expresia diferențială a izoformelor dacă izoformele sunt cuantificate din timp cu alte instrumente precum RSEM. [124]

Rețele de coexpresie Edit

Rețelele de coexpresie sunt reprezentări derivate din date ale genelor care se comportă în mod similar în țesuturi și condiții experimentale. [125] Scopul lor principal constă în generarea de ipoteze și abordările de vinovăție prin asociere pentru deducerea funcțiilor genelor necunoscute anterior. [125] Datele ARN-Seq au fost folosite pentru a deduce gene implicate în căi specifice pe baza corelației Pearson, atât la plante [126], cât și la mamifere. [127] Principalul avantaj al datelor ARN-Seq în acest tip de analiză față de platformele microarray este capacitatea de a acoperi întregul transcriptom, permițând astfel posibilitatea de a dezvălui reprezentări mai complete ale rețelelor de reglare a genelor. Reglarea diferențială a izoformelor de îmbinare ale aceleiași gene poate fi detectată și utilizată pentru a prezice funcțiile lor biologice. [128] [129] Analiza ponderată a rețelei de co-expresie a genelor a fost utilizată cu succes pentru a identifica modulele de co-expresie și genele hub intramodulare pe baza datelor ARN seq. Modulele de co-expresie pot corespunde tipurilor de celule sau căilor. Hub-urile intramodulare puternic conectate pot fi interpretate ca reprezentanți ai modulului respectiv. O eigene este o sumă ponderată a expresiei tuturor genelor dintr-un modul. Eigenele sunt biomarkeri (caracteristici) utili pentru diagnostic și prognostic. [130] Au fost propuse abordări de transformare cu stabilizare a variației pentru estimarea coeficienților de corelație pe baza datelor ARN seq. [126]

Descoperirea variantei Editare

ARN-Seq captează variația ADN-ului, inclusiv variante de un singur nucleotide, inserții/deleții mici. și variația structurală. Apelarea variantelor în ARN-Seq este similară cu apelarea variantei ADN și utilizează adesea aceleași instrumente (inclusiv SAMtools mpileup [131] și GATK HaplotypeCaller [132] ) cu ajustări pentru a ține cont de splicing. O dimensiune unică pentru variantele de ARN este expresia specifică alelei (ASE): variantele dintr-un singur haplotip ar putea fi exprimate de preferință datorită efectelor de reglementare, inclusiv loci de trăsături cantitative de imprimare și expresie și variante rare necodificante. [133] [134] Limitările identificării variantelor de ARN includ faptul că reflectă doar regiunile exprimate (la om, <5% din genom), ar putea fi supusă unor distorsiuni introduse de prelucrarea datelor (de exemplu, ansamblurile de transcriptom de novo subestimează heterozigozitatea [135] ) și are o calitate mai scăzută în comparație cu secvențierea directă a ADN-ului.

Editarea ARN (alterări post-transcripționale) Edit

A avea secvențele genomice și transcriptomice care se potrivesc ale unui individ poate ajuta la detectarea modificărilor post-transcripționale (editarea ARN). [3] Un eveniment de modificare post-transcripțional este identificat dacă transcriptul genei are o alelă/variantă neobservată în datele genomice.

Detectarea genelor de fuziune Edit

Cauzate de diferite modificări structurale ale genomului, genele de fuziune au câștigat atenția datorită relației lor cu cancerul. [136] Capacitatea ARN-Seq de a analiza întregul transcriptom al unei probe într-un mod imparțial îl face un instrument atractiv pentru a găsi aceste tipuri de evenimente comune în cancer. [4]

Ideea decurge din procesul de aliniere a citirilor transcriptomice scurte la un genom de referință. Cele mai multe dintre citirile scurte se vor încadra într-un exon complet și ar fi de așteptat ca un set mai mic, dar încă mare, să se mapeze la joncțiunile exon-exon cunoscute. Citirile scurte rămase nemapate vor fi apoi analizate în continuare pentru a determina dacă se potrivesc cu o joncțiune exon-exon în care exonii provin din gene diferite. Aceasta ar fi o dovadă a unui posibil eveniment de fuziune, totuși, din cauza lungimii citirilor, acest lucru s-ar putea dovedi a fi foarte zgomotos. O abordare alternativă este folosirea citirilor la capătul pereche, când un număr potențial mare de citiri pereche ar mapa fiecare capăt la un exon diferit, oferind o acoperire mai bună a acestor evenimente (vezi figura). Cu toate acestea, rezultatul final constă în combinații multiple și potențial noi de gene, oferind un punct de plecare ideal pentru validarea ulterioară.

ARN-Seq a fost dezvoltat pentru prima dată la mijlocul anilor 2000, odată cu apariția tehnologiei de secvențiere de ultimă generație. [139] Primele manuscrise care au folosit ARN-Seq chiar și fără a folosi termenul le includ pe cele ale liniilor celulare de cancer de prostată [140] (datate 2006), Medicago truncatula [141] (2006), porumb [142] (2007) și Arabidopsis thaliana [143] (2007), în timp ce termenul „ARN-Seq” în sine a fost menționat pentru prima dată în 2008 [144] Numărul de manuscrise care se referă la ARN-Seq în titlu sau rezumat (Figura, linie albastră) este în continuă creștere cu 6754 manuscrise publicat în 2018. Intersecția dintre ARN-Seq și medicament (Figura, linia de aur) are o viteză similară. [145]

Aplicații în medicină Edit

ARN-Seq are potențialul de a identifica o nouă biologie a bolii, de a profila biomarkeri pentru indicații clinice, de a deduce căi de droguri și de a face diagnostice genetice. Aceste rezultate ar putea fi personalizate în continuare pentru subgrupuri sau chiar pacienți individuali, evidențiind potențial prevenirea, diagnosticarea și terapia mai eficiente. Fezabilitatea acestei abordări este parțial dictată de costurile în bani și timp, o limitare aferentă este echipa necesară de specialiști (bioinformaticieni, medici/clinicieni, cercetători de bază, tehnicieni) pentru a interpreta pe deplin cantitatea imensă de date generate de această analiză. [146]

Eforturi de secvențiere la scară largă Editare

S-a acordat mult accent datelor ARN-Seq după ce proiectele Encyclopedia of DNA Elements (ENCODE) și The Cancer Genome Atlas (TCGA) au folosit această abordare pentru a caracteriza zeci de linii celulare [147] și mii de mostre de tumoră primară, [148] respectiv. ENCODE a avut ca scop identificarea regiunilor de reglementare la nivelul genomului în diferite cohorte de linii celulare, iar datele transcriptomice sunt esențiale pentru a înțelege efectul în aval al acelor straturi de reglare epigenetice și genetice. În schimb, TCGA și-a propus să colecteze și să analizeze mii de mostre de pacienți din 30 de tipuri diferite de tumori pentru a înțelege mecanismele de bază ale transformării și progresiei maligne. În acest context, datele ARN-Seq oferă un instantaneu unic al stării transcriptomice a bolii și se uită la o populație imparțială de transcrieri care permite identificarea de noi transcrieri, transcrieri de fuziune și ARN-uri necodificatoare care ar putea fi nedetectate cu diferite tehnologii.

Acest articol a fost trimis către WikiJurnal de Știință pentru evaluarea externă academică inter pares în 2019 (rapoartele recenzenților). Conținutul actualizat a fost reintegrat în pagina Wikipedia sub o licență CC-BY-SA-3.0 (2021). Versiunea înregistrării așa cum a fost revizuită este: Felix Richter și colab. (17 mai 2021). „O introducere largă în ARN-Seq”. WikiJurnal de Știință. 4 (2): 4. doi:10.15347/WJS/2021.004. ISSN 2470-6345. Wikidata Q100146647.


13.5: Capcanele potențiale și cum să le evitați - Biologie

Este unul dintre cele mai grave coșmaruri ale unui avocat: pierderea unui termen de prescripție. Poate fi o greșeală foarte ușor de făcut și totuși consecințele pot fi enorme.

Există numeroase „capcane” care pot duce la pierderea perioadelor de prescripție și la alte probleme legate de perioada de prescripție. Unele dintre aceste capcane sunt relativ ușor de evitat, în timp ce altele se pot împiedica chiar și pe cei mai pricepuți și atenți dintre avocați.

Următoarea este o prezentare generală a unora dintre capcanele mai frecvente ale perioadei de prescripție pe care le întâmpină avocații și câteva sfaturi despre cum să evite aceste capcane. Unele dintre aceste capcane ar trebui să fie destul de evidente (dar trebuie totuși menționate), în timp ce altele ar putea să nu fie atât de evidente. În timp ce acest articol este destinat în primul rând avocaților în justiție, unele dintre capcanele discutate pot fi întâmpinate de persoane care nu sunt în justiție.

a) Trecerea cu vederea perioadelor de prescripție mai puțin obișnuite

Luând în considerare faptul că majoritatea revendicărilor sunt supuse termenului de prescripție de 2 ani stabilit în Legea privind limitările, 2002, avocații se pot concentra prea mult pe acest termen de prescripție de 2 ani și pot pierde evidența altor termene de prescripție potențial relevante.

In timp ce Legea privind limitările, 2002 se aplică majorității cauzelor de acțiune din Ontario, este doar unul dintre cele peste 40 de statute din Ontario care impun termene de prescripție. Cele mai multe dintre aceste statute (și prevederile aplicabile cu aceste statute sunt enumerate în anexa la Legea privind limitările, 2002. Avocații în justiție ar trebui să se familiarizeze cu acest program. În mod semnificativ, programul nu include termene de prescripție impuse în conformitate cu statutele federale și, de asemenea, nu include perioade de prescripție care decurg din statutele la care se face referire în secțiunea 2(1) din Legea privind limitările, 2002.

Unele dintre perioadele de prescripție mai des ignorate (și, prin urmare, periculoase) includ: i) perioada de prescripție prevăzută în secțiunea 38(3) din Actul de administrator, care se aplică anumitor cereri formulate de sau împotriva succesiunii unei persoane decedate ii) termenul de prescripție de 6 luni pentru cererile de scutire a persoanelor aflate în întreținere, care este prevăzut în secțiunea 61 din Actul de reformare a legii succesorale și iii) termenul de prescripție de un an prevăzut în secțiunea 259.1 din Legea asigurărilor, care se aplică „o procedură împotriva unui asigurător în temeiul unui contract cu privire la pierderea sau deteriorarea unui automobil sau a conținutului acestuia”.

De asemenea, avocații încep acum să piardă termenul de prescripție final de 15 ani, prevăzut în secțiunea 15 din Legea privind limitările, 2002. Acest termen de prescripție a devenit doar recent o problemă, deoarece prima dată la care ar putea expira era 1 ianuarie 2019. Până în prezent, cazurile în care termenul de prescripție final a expirat par să implice în principal pretenții împotriva profesioniștilor (probabil, deoarece pretențiile împotriva profesioniștilor pot uneori durează mulți ani pentru a descoperi).

De asemenea, avocații trebuie să fie atenți la termenele de prescripție impuse de contracte. Astfel de termene de prescripție tind să fie destul de răspândite în contractele standard, inclusiv în polițele de asigurare și contractele de reținere, utilizate de unele firme profesionale (de exemplu: firme de contabilitate mari). Termenele de prescripție impuse contractual sunt, de asemenea, frecvente în convențiile de arbitraj.

b) Bazându-se în mod necorespunzător pe descoperire

Poate fi periculos pentru avocați să se bazeze pe descoperibilitate atunci când determină momentul în care să înceapă litigiul. Descoperirea este un concept înșelător de complicat, care nu este întotdeauna tratat în mod consecvent de către instanțe. Există adesea mai multe argumente valide care pot fi făcute cu privire la momentul în care o revendicare a fost descoperită sau ar fi trebuit să fie descoperită și nu toate aceste argumente pot fi imediat evidente. Mai mult, este posibil ca avocații să nu aibă întotdeauna o înțelegere suficient de bună a faptelor pentru a putea evalua în mod corespunzător capacitatea de descoperire.

În mod semnificativ, există anumite perioade de prescripție care nu sunt supuse descoperirii. Două dintre cele mai notabile exemple în acest sens sunt: ​​a) limitarea finală de 15 ani în temeiul Actul Limitărilor, 2002 și b) articolul 38 alineatul (3) din Actul de administrator, care curge de la data decesului persoanei decedate în cauză, indiferent de posibilitate de descoperire. De asemenea, este posibil ca descoperirea să nu se aplice unor perioade de prescripție impuse contractual, în funcție de modul în care sunt formulate.

Nu este întotdeauna clar dacă un anumit termen de prescripție poate fi descoperit. Dacă o prevedere privind termenul de prescripție prevede că termenul de prescripție începe să curgă atunci când a avut loc cauza acțiunii sau a daunelor sau se referă în mod specific la posibilitatea de descoperire, atunci descoperibilitatea se poate aplica foarte bine, în timp ce prevederea prevede că termenul de prescripție începe să curgă într-un alt moment, cum ar fi data unui deces, este posibil ca descoperirea să nu se aplice.

Având în vedere faptul că descoperibilitatea este un concept complicat și că unele perioade de prescripție nu sunt supuse descoperibilității, cea mai sigură cale de acțiune este de a lansa procese suficient de devreme încât să nu fie nevoie să se bazeze pe descoperire.

c) Presupunând că termenul de prescripție pentru o cerere de concediere abuzivă începe să curgă de la data încetării raportului de muncă;

În Jones v. Friedman, Curtea de Apel din Ontario a luat în considerare termenul de prescripție pentru cererile de concediere abuzive. Acest caz a implicat un angajat căruia i s-a comunicat la 12 decembrie 1994 că i se va înceta raportul de muncă începând cu 31 ianuarie 1995. Curtea de Apel a reținut că termenul de prescripție a început să curgă în momentul în care angajatul a primit notificarea de încetare (12 decembrie). , 1994) și nu de la data la care a încetat raportul de muncă al salariatului (31 ianuarie 1995).

Jones v. Friedman a împiedicat mulți avocați, deoarece unii avocați presupun că termenul de prescripție nu începe să curgă până la data efectivă a rezilierii, mai degrabă decât la data la care a fost dat notificarea de reziliere. Din fericire, această presupunere problematică poate să nu fie întotdeauna fatală. Mai degraba, Jones (care s-a hotărât sub primul Actul Limitărilor) pot fi distinse în unele cazuri în lumina Webster v. Almore Trading & Manufacturing Co, unde judecătorul Pitt a susținut:

Concedierea abuzivă, în opinia mea, ridică o problemă deosebit de dificilă în contextul limitării, deoarece nu o concediere în sine poate fi acționată, ci mai degrabă concedierea fără preaviz sau salariu rezonabil în locul unei astfel de preaviz, care este acționabilă. În consecință, termenul de prescripție pentru o acțiune în concediere abuzivă nu curge neapărat de la data concedierii efective. Se activează atunci când se descoperă cauza acțiunii – adică data la care angajatul concediat a știut sau ar fi trebuit să știe că a fost concediat fără motiv și fără preaviz sau plată în loc de preaviz și că o procedură ar fi o modalitate adecvată. pentru a obține despăgubiri. Data descoperirii poate fi ulterioară datei concedierii.

Decizia Webster a fost menționată în mod aprobat în cauza Ng v. Bank of Montreal, unde justiția D.M. Brown a susținut:

În cererile de concediere abuzivă, cauza de acțiune apare de obicei atunci când contractul a fost încălcat – adică atunci când angajatorul a concediat angajatul fără o notificare rezonabilă: Jones v. Friedman, 2006 CanLII 580 (ON CA), 2006 CanLII 580 (ON C.A.), alin. 3 și 4. Faptele specifice unui caz pot pune în discuție acest principiu general și pot indica o dată ulterioară, ca cea la care a fost descoperită cererea: Webster v. Almore Trading & Manufacturing Company Ltd., 2010 ONSC 3854 (CanLII).

În consecință, există cel puțin un argument că termenul de prescripție pentru cererile de concediere nelegală poate să nu înceapă să curgă până când angajatul descoperă sau ar fi trebuit să descopere că el sau ea nu a primit o notificare adecvată de reziliere sau plata în locul preavizului. În cele mai multe cazuri, angajatul ar trebui să se consulte cu un avocat pentru a putea descoperi acest lucru.

Având în vedere că legea privind termenele de prescripție pentru cererile de concediere abuzivă este nesoluționată, avocații ar trebui, desigur, să se asigure că cererile de concediere abuzivă sunt depuse în termen de doi ani de la notificarea încetării. Avocații nu ar trebui să se pună într-o poziție în care trebuie să încerce să se bazeze pe Webster și Ng decizii dacă acest lucru poate fi evitat.

d) Presupunând că termenul de prescripție pentru daune împotriva asigurătorilor curge de la data la care asigurătorul a refuzat acoperirea

Avocații presupun uneori că termenul de prescripție pentru cererile împotriva asigurătorilor pentru acoperire începe să curgă atunci când asigurătorul neagă în mod clar acoperirea. Din păcate, aceasta poate fi o presupunere periculoasă, deoarece jurisprudența relevantă este contradictorie. Pe de o parte, decizia Curții de Apel din Ontario în Kassburg v. Sun Life Assurance Co. din Canada, susține afirmația că termenul de prescripție pentru o cerere de acoperire împotriva unui asigurător nu începe să curgă până când asigurătorul neagă în mod clar acoperirea. Pe de altă parte, deciziile Curții de Apel din Schmitz v.Lombard General Insurance Company din Canada și Nasr Hospitality Services Inc. v. Intact Insurance susțin propunerea conform căreia termenul de prescripție începe să curgă a doua zi după ce asiguratul solicită acoperire.

În special, în Kassburg, care presupunea o cerere de invaliditate de lungă durată, instanței nu i s-a cerut în mod expres să decidă dacă termenul de prescripție a început să curgă atunci când cererea a fost în mod evident respinsă (chiar asiguratorul pârât a părut să accepte că acesta curge de la data respingerii). Mai degrabă, instanței i s-a cerut, în contextul unei cereri de judecată sumară, să analizeze dacă scrisoarea de refuz a asigurătorului a constituit o negare clară sau dacă termenul de prescripție a început să curgă numai după epuizarea procedurii interne de recurs a asigurătorului. Moțiunile judecă în Kassburg a constatat că acesta din urmă a fost cazul. În apelul asigurătorului, Curtea de Apel a constatat că este în fața judecătorului de acțiune să facă această constatare și a respins recursul.

Este semnificativ faptul că decizia din Kassburg nu face referire la decizia anterioară în Schmitz. Mai mult, decizia din Nasr nu face referire la decizia anterioară în Kassburg. De asemenea, este semnificativ faptul că, în timp ce majoritatea în Nasr a considerat că termenul de prescripție curgea de la momentul în care a fost solicitată acoperirea, judecătorul Feldman a exprimat o disidență puternică.

e) Neavertizarea cu privire la termenul de prescripție în situații fără reținere sau în cazul în care un client nu oferă instrucțiuni în timp util pentru a începe litigiul

Pot avocații să aibă o expunere la răspundere față de potențiali clienți pentru care nu ajung să acționeze? Există cel puțin riscul ca acest lucru să se întâmple dacă un avocat (sau firma de avocați) comunică cu potențialul client, dar nu îl avertizează pe potențialul client cu privire la un termen de prescripție aplicabil.

Pentru a se proteja împotriva posibilei expuneri la răspundere față de non-clienți, un avocat sau o firmă de avocatură ar trebui să ia următorii pași în scris (și în mod ideal și verbal) oricând se consultă cu potențiali clienți, dar nu au fost reținute: a) confirmă că nu au fost reținute b) avertizează că revendicarea potențialului client este supusă unui termen de prescripție (și a unei perioade de notificare, dacă este cazul ) și că este imperativ ca orice proces să fie început înainte de expirarea termenului de prescripție c) să informeze clientul potențial că avocatul/firma nu este în măsură să anunțe când expiră termenul de prescripție (în mod alternativ, avocații pot consilia clientul potențial când expiră probabil limitarea, dar ar fi prudent să se indice, de asemenea, că clientul potențial nu ar trebui să se bazeze pe acest lucru, deoarece problema nu a fost evaluată pe deplin) d) să informeze că, în lumina termenului de prescripție, clientul trebuie consultați fără întârziere un consilier alternativ dacă clientul este în continuare interesat să depună un litigiu și e) să confirme că clientului i s-a oferit un avertisment verbal cu privire la termenul de prescripție în plus față de avertisment scris (dacă este cazul).

În mod similar, este prudent ca avocații să avertizeze clienții existenți în scris (și, în mod ideal, și verbal) cu privire la termenele de prescripție în care: a) clientul are o potențială pretenție împotriva unei terțe părți, dar nu a furnizat instrucțiuni în timp util pentru a începe litigiul sau b) mandatul avocatului se încheie înainte de începerea procesului clientului. În mod ideal, un astfel de avertisment ar trebui dat chiar dacă avocatul consideră că potențialul proces al clientului este lipsit de fond și, prin urmare, nu merită urmărit.

Avertismentele scrise cu privire la termenele de prescripție ar trebui, în mod ideal, să fie livrate manual sau trimise folosind o metodă de livrare care poate fi urmărită, cum ar fi poșta recomandată sau curierul. Clienții și potențialii clienți pot nega cu ușurință că au primit avertismente trimise prin poștă obișnuită.

Trebuie remarcat faptul că eșecul de a avertiza clienții și potențialii clienți în situațiile menționate mai sus poate să nu constituie neapărat o încălcare a standardului de îngrijire aplicabil. Cu toate acestea, chiar dacă nu are ca rezultat o încălcare a standardului de îngrijire, nerespectarea acestor măsuri ar putea avea ca rezultat o reclamație din partea clientului sau a potențialului client împotriva avocatului.

f) Neavertizarea cu privire la termenul de prescripție pentru revendicările aferente

Clienții au adesea mai multe revendicări potențiale care decurg din același set de fapte. De exemplu, un client care este implicat într-un accident de autovehicul poate avea, printre altele, o cerere de indemnizație de accident, o cerere de delict, o cerere de autoritate rutieră, o cerere de invaliditate sau chiar o cerere de drept al muncii. În timp ce avocații își pot limita forțele la doar unele dintre revendicările potențiale ale unui client, avocații care fac acest lucru ar putea avea totuși obligația de a avertiza clientul asupra faptului că există celelalte pretenții și de a avertiza că astfel de revendicări sunt supuse unor perioade de prescripție. În consecință, avocații ar trebui să se gândească la ce pretenții potențiale le poate avea un client în afară de pretențiile pe care trebuie să le gestioneze și ar trebui să-l informeze pe client în scris despre aceste potențiale revendicări, faptul că clientul va trebui să apeleze la alți avocați pentru a le urmări. , precum și faptul că revendicările sunt supuse unui termen de prescripție (și unei perioade de preaviz, dacă este cazul).

g) Nerespectarea termenului de prescripție în încercarea de a negocia o înțelegere

Uneori, avocații trec cu vederea termenele de prescripție în timp ce au loc discuții de reglementare. Această greșeală este uneori făcută de către non-litigenți în circumstanțe în care ne-avocatul încearcă să rezolve un litigiu care a apărut în mod neașteptat dintr-un mandat necontenționar fără a solicita asistența unui consilier în litigiu.

Există autoritate pentru propunerea conform căreia discuțiile de soluționare nu opresc, în general, termenul de prescripție, cu excepția cazului în care: a) părțile au convenit ca un terț neutru, cum ar fi un mediator, să faciliteze negocierile; stabilite (stabilirea excluderii și/sau renunțării în aceste situații este dificilă) sau c) părțile au încheiat un acord de taxare.

Avocații care se confruntă cu probleme legate de termenul de prescripție în timpul discuțiilor de soluționare se întreabă uneori dacă pot ataca apărarea termenului de prescripție pe motiv că părțile adverse nu au fost prejudiciate de întârzierea începerii litigiului (deoarece părțile adverse au fost întotdeauna conștiente că un revendicarea a fost susținută). Din păcate, problema prejudiciului este, în general, irelevantă în ceea ce privește dacă un termen de prescripție a expirat (cu excepția cazurilor rare în care prevederea specifică a termenului de prescripție în cauză prevede că prejudiciul poate fi luat în considerare).

În circumstanțe în care o dispută potențial litigioasă decurge dintr-o tranzacție imobiliară sau corporativă (sau alte chestiuni care nu sunt litigioase), clienții vor refuza ocazional să recurgă la un consilier de litigiu, în ciuda faptului că sunt îndemnați să facă acest lucru de către consilierul lor care nu este litigiu. În aceste circumstanțe, cei care nu sunt în justiție trebuie să facă mai mult decât să recomande în scris ca clientul să vadă un avocat. De asemenea, trebuie să avertizeze clientul în scris că poate exista un termen de prescripție aplicabil care ar putea expira în orice moment și că nu pot să opineze cu privire la momentul expirării termenului de prescripție sau să ia măsuri pentru a preveni expirarea acestuia, deoarece nu sunt justițiabili. .

h) Neinvestigarea adecvată a faptelor

Este periculos să vă bazați prea mult pe clienți pentru a vă informa despre fapte semnificative și datele relevante legate de o reclamație. Clienții sunt adesea nesiguri – mai ales în ceea ce privește datele. În unele cazuri, documentele și informațiile ușor disponibile vor conține fapte care nu sunt în concordanță cu informațiile furnizate de client.

Faptul că un termen de prescripție ar fi putut fi ratat din cauza informațiilor inexacte furnizate de un client nu îl absolvă neapărat pe avocat. Mai degrabă, un avocat poate fi expus la răspundere dacă: a) avocatul nu poate dovedi că clientul a fost sursa informațiilor incorecte b) avocatul ar fi trebuit să poată obține informațiile faptice corecte din documente sau din alte surse sau punând clientului întrebările corecte și/sau c) avocatul nu a avertizat în mod adecvat clientul asupra importanței asigurării faptului că informațiile furnizate de client sunt exacte.

Când avocații află în cele din urmă că s-au bazat pe fapte incorecte, nu este neobișnuit ca ei să afle acest lucru de la client. Adesea, ei învață despre acest lucru în timp ce pregătesc clientul pentru o examinare sau la examinarea propriu-zisă. Faptul că acest lucru se întâmplă adesea sugerează că avocații pot minimiza riscul acestei capcane a perioadei de prescripție prin revizuirea mai amănunțită a faptelor împreună cu clienții lor de la începutul contractului de reținere și îndrumarea clienților către documente, fotografii și hărți relevante, în efortul de a-și deplasa. amintiri și să-i ajute să-și articuleze versiunea despre evenimente (folosirea hărților și/sau a fotografiilor aeriene este deosebit de utilă în circumstanțe în care este important să fii sigur unde a avut loc o accidentare sau un eveniment).

Alți pași pe care avocații ar trebui să îi ia în încercarea de a evita această capcană a perioadei de prescripție includ: a) obținerea și revizuirea promptă a documentelor/informațiilor relevante după reținere; b) utilizarea căutărilor corporative, căutărilor de titluri și diferite alte căutări potențiale pentru a confirma informațiile furnizate de clienți; ) luarea de note bune cu privire la discuțiile cu clienții cu privire la faptele de fond e) începerea promptă a litigiilor și f) dacă este posibil, trecerea la examinări pentru descoperire înainte de expirarea oricăror posibil termene de prescripție

i) Nenumirea inculpaților „John Doe”, acolo unde este cazul

Nu este întotdeauna clar cine ar trebui să fie numit ca pârât la începutul unui litigiu. În aceste circumstanțe, este adesea prudent să se numească unul sau mai mulți inculpați John Doe drept deținători de loc.

Scopul pledoarii unui pârât John Doe este de a proteja reclamantul și avocatul reclamantului de circumstanțe în care se susține ulterior că ar fi trebuit să cunoască identitatea pârâtului în cauză și că, prin urmare, termenul de prescripție a fost ratat. Numind un pârât John Doe, un reclamant poate evita, de obicei, problemele legate de termenul de prescripție, înlocuind pârâtul John Doe cu pârâtul corect după aflarea identității pârâtului corect.

Este important să invocăm faptele materiale care susțin cererea împotriva inculpatului John Doe. Acestea fiind spuse, este la fel de important să se evite ca pledoaria să fie atât de specifică încât s-ar putea să nu descrie cu exactitate pârâtul care este în cele din urmă identificat.

De exemplu, într-o problemă de alunecare și cădere în care nu este clar dacă a existat o companie de întreținere potențial responsabilă, ar fi oportun să se numească un pârât John Doe și apoi să susțină că John Doe a fost responsabil în temeiul unui contract sau în alt mod pentru întreținerea premise, dar că John Doe nu a reușit să facă acest lucru. Pe de altă parte, s-ar putea să nu fie recomandabil să mergem atât de departe încât să pledăm în mod special că John Doe a avut un contract de întreținere. cu proprietarul imobilului în cauză întrucât este posibil să fi avut în schimb contract cu o altă parte, cum ar fi un chiriaș.

j) Confuzie în timpul transferurilor de fișiere

Termenele de prescripție sunt adesea ratate în timpul sau la scurt timp după ce un dosar de litigiu este transferat între avocați. În aceste circumstanțe, atât avocatul care transferă dosarul, cât și noul avocat pot fi expuși unei reclamații. Pentru a evita astfel de situații, atunci când dosarele sunt transferate între avocați/firme ar trebui luați în considerare următorii pași: a) este o bună practică ca un avocat care transferă dosarul să-l informeze pe noul avocat, în scris, cu privire la orice moment sensibil. probleme, inclusiv termenele limită viitoare de prescripție b) este o bună practică ca avocatul care primește dosarul (noul avocat) să solicite aceleași informații în scris, în măsura în care nu sunt furnizate imediat c) noul avocat ar trebui să ia în considerare clarificarea acestora în scris clientului și avocatului inițial că acesta nu va accepta reținerea până la primirea dosarului de la vechiul avocat și d) noul avocat trebuie să examineze dosarul imediat după primirea acestuia.

k) Aşteptarea până în ultimul moment posibil pentru a emite o revendicare

Unii avocați par să aștepte în mod obișnuit până în ultimul moment posibil (sau aproape ultimul moment posibil) pentru a emite pretenții. Multe probleme legate de termenele de prescripție apar din situațiile în care avocații au făcut acest lucru.

Amânarea emiterii unei cereri pentru o perioadă lungă de timp este în majoritatea cazurilor o practică proastă. Cu excepția cazului în care există un motiv întemeiat pentru a renunța la emiterea unei cereri de despăgubire, avocații ar trebui să urmărească să emită cereri rapid.

Există numeroase probleme care pot apărea din suspendarea emiterii unei cereri, chiar dacă data de expirare a termenului de prescripție poate părea clară și evidentă. De exemplu, ce se întâmplă dacă datele relevante furnizate de un client (sau care sunt stabilite în documentele cheie) se dovedesc a fi greșite? Ce se întâmplă dacă se comite o eroare în agenizarea termenului de prescripție? Ce se întâmplă dacă inculpatul este mort fără ca avocatul să știe și articolul 38(3) din Actul de administrator deci se aplica? Ce se întâmplă dacă un termen de prescripție contractual a fost trecut cu vederea? Ce se întâmplă dacă te îmbolnăvești chiar înainte ca termenul de prescripție să expire? Ce se întâmplă dacă apare un derapaj administrativ care provoacă întârzierea emiterii cererii? Ce se întâmplă dacă personalul instanței respinge cererea dintr-un motiv tehnic?

Emiterea unui proces în ultimul moment posibil poate duce la probleme legate de termenul de prescripție chiar și în cazul în care se dovedește că procesul a fost emis în termenul de prescripție. De exemplu, dacă devine evident din Declarația de apărare a pârâtului sau în alt mod că a fost omisă o cerință de notificare (cum ar fi cerința de notificare în temeiul Proceduri împotriva Legii Coroanei), este posibil să se remedieze acest lucru prin notificarea și emiterea unei noi cereri, dar numai dacă termenul de prescripție nu a expirat încă. În plus, dacă din informațiile apărute în urma emiterii unui proces reiese că memoriile trebuie modificate sau că trebuie adăugate noi părți la litigiu, este posibil să nu fie posibilă acest lucru dacă termenul de prescripție a depășit.

În mod ideal, avocații ar trebui să emită acțiuni cât mai curând posibil și ar trebui să încerce să își lase suficient timp pentru a finaliza examinările pentru descoperire înainte de expirarea oricărui termen de prescripție. Acest lucru va ajuta la garantarea faptului că noile revendicări pot fi invocate fără o problemă cu termenul de prescripție, dacă necesitatea de a face acest lucru devine evidentă ca urmare a descoperirilor.

Dacă există un motiv legitim pentru a renunța la urmărirea unei revendicări, este în mod normal o practică mai bună să emiti o revendicare, dar să amâni temporar serviciul procesului de inițiere decât să amâni în totalitate emiterea acesteia. Deși ar trebui depuse eforturi pentru a se asigura că termenul limită pentru service nu este ratat, dacă acesta este ratat, acesta este de obicei reparabil prin intermediul unei moțiuni de extindere a serviciului sau de validare a serviciului, în timp ce un termen de prescripție ratat este în mod normal fatal.

l) Eșecul de a invoca descoperibilitatea

În cazul în care pârâtul a susținut că o veică este prescrisă și reclamantul intenționează să încerce să ocolească termenul de prescripție bazându-se pe descoperibilitate, reclamantul trebuie să invoce faptele care susțin argumentul descoperibilității într-un răspuns sau în alt mod. Nerespectarea acestui lucru ar putea împiedica reclamantul să poată susține posibilitatea de descoperire în cadrul procesului sau în cadrul unei cereri (în special, decizia din cauza Collins v. Cortez sugerează că nerespectarea de a invoca descoperirea nu va fi fatală în cazul unei cereri de judecată sumară, ca distinct de la o moțiune în grevă sau alte cereri de pledoarie).

m) Eșecul de a lua măsurile adecvate când a aflat că o parte necesară a fost exclusă dintr-o revendicare

Ce faceți dacă vă dați seama de mulți ani într-o chestiune de litigiu că o parte incorectă a fost numită pârât sau reclamant sau că nu ați numiți o parte necesară. Este adesea posibil să se corecteze aceste probleme în pofida termenului de prescripție aplicabil, bazându-se pe unul sau mai multe dintre următoarele: i) posibilitatea de descoperire ii) secțiunile 6, 7, 11 și 16 din Legea privind limitările, 2002, care stabilește diverse circumstanțe în care termenul de prescripție poate să nu curgă sau să nu se aplice iii) secțiunea 21(2) din Limitations Act, 2002, care permite corectarea denumirii sau descriere greșită a unei părți după expirarea termenului de prescripție iv) doctrina circumstanțelor speciale (această doctrină este disponibilă numai în ceea ce privește anumite termene de prescripție) v) compensare și/sau vi) în unele cazuri rare, Regula 2.01 din Reguli de procedură civilă.

În aceste circumstanțe, unii avocați aleg să emită un nou proces separat împotriva părții dorite, mai degrabă decât să depună o moțiune de adăugare a părții dorite la litigiul existent. Avantajul acestei abordări este că evită necesitatea unei moțiuni potențial contestate. Cu toate acestea, această abordare vine cu un anumit risc în lumina deciziei în Maynes împotriva Allen-Vanguard Technologies Inc., în care Curtea de Apel din Ontario a constatat că emiterea unui proces separat poate constitui un abuz de proces. In timp ce Maynes Decizia a fost ulterior distinsă de Curtea de Apel din Ontario în Abarca v. Vargas, legea privind dacă este permisă emiterea unui proces separat în aceste circumstanțe rămâne în continuă evoluție și, prin urmare, emiterea unui proces separat, mai degrabă decât introducerea unei moțiuni, poate deseori (dar poate nu întotdeauna) să nu fie recomandabilă.

În situațiile în care secțiunea 21(2) din Legea privind limitările, 2002 pe care se invocă, în mod normal este important ca noua parte să fie înlocuită cu o parte existentă în litigiu. Acestea fiind spuse, instanțele au indicat că ar putea fi posibil, în anumite circumstanțe limitate, să se bazeze pe articolul 21(2) din Legea privind limitările, 2002 pentru a adăuga o nouă parte în litigiu, în loc să înlocuiască o parte.

Din păcate, avocații „înghețează” uneori când află că o parte adecvată a fost lăsată în afara unei chestiuni de litigiu, poate pentru că nu știu cum să rezolve problema sau presupun că este prea târziu pentru a rezolva problema. Acesta poate fi cel mai rău lucru pe care îl poate face un avocat în aceste situații, deoarece întârzierile în depunerea unei moțiuni sau emiterea unui nou proces pentru a rezolva aceste probleme pot fi fatale. În special, în situațiile în care este prezentată o moțiune de adăugare a unei noi părți, termenul de prescripție încetează de îndată ce moțiunea este notificată.

n) Nerespectarea unor proceduri adecvate pentru a se asigura că termenele de prescripție nu sunt ratate

În mod ideal, avocații ar trebui să ia în considerare problemele legate de perioada de prescripție (și cerințele de notificare) de îndată ce acceptă un nou mandat (sau chiar dacă au în vedere un nou mandat). Avocații ar trebui să evite aranjamentele în care acceptă rețineri automat sau în care cei care nu sunt avocați acceptă rețineri pentru ei, deoarece astfel de aranjamente creează circumstanțe în care termenele de prescripție pot fi ratate înainte ca avocatul să știe chiar că a fost reținut.

Termenele limită ale perioadei de prescripție ar trebui să fie promptate. În mod ideal, sistemul de jurnal al unui avocat ar trebui să fie configurat astfel încât să poată rezista mai multor erori (de exemplu, ar putea fi conceput pentru a solicita ca datele să fie diarizate de mai multe persoane în mai multe locuri).Sistemul ar trebui, de asemenea, configurat pentru a se asigura că, chiar dacă avocatul care preda un anumit dosar se îmbolnăvește sau părăsește firma, un alt avocat va fi anunțat în timp util cu privire la termenele limită.

Firmele ar trebui să fie atenți la faptul că termenele de prescripție pot fi o problemă chiar și atunci când acționează pentru pârâți, deoarece cererile reconvenționale, cererile încrucișate și cererile terților au, de asemenea, termene de prescripție. Perioadele de prescripție pentru aceste tipuri de revendicări trebuie, de asemenea, să fie diarizate.

Firmele ar trebui să se asigure că fiecare dosar este atribuit unui avocat la un moment dat și că există o înregistrare scrisă cu privire la dosarul care îi este atribuit unui avocat (pentru a evita confuzia). Atunci când un avocat părăsește firma, avocatului ar trebui să i se solicite în mod normal să pregătească o nota de transfer, iar nota de transfer ar trebui să abordeze întotdeauna orice termen de prescripție care ar putea exista.

o) Preluarea prea multor fișiere

Acest lucru ar trebui să fie evident, dar totuși trebuie spus: preluarea prea multor fișiere crește, fără îndoială, posibilitatea de erori, inclusiv perioadele de prescripție ratate.

Deși lista de capcane menționată mai sus nu este deloc exhaustivă, ea acoperă multe dintre situațiile care duc la pierderea termenelor de prescripție. În consecință, avocații care evită cu succes capcanele menționate mai sus (poate mai ușor de spus decât de făcut) au șanse mari de a evita cu totul problemele legate de perioada de prescripție.

De Jordan Nichols, director de unitate și consilier la LAWPRO¹

¹ Acest articol a fost întocmit și publicat inițial în aprilie 2017 și apoi actualizat în martie 2019. Mulțumim lui Tova Cranford și Chantelle Dallas pentru asistență la editare și la notarea jurisprudenței.


2 Supraîncărcare informațională

Atunci când construiți o interfață mobilă pentru aplicația dvs. BI, poate fi tentant să încercați să reproduceți experiența desktop, cu toate informațiile detaliate și designul pe care le implică. Dar tablourile de bord mobile Bl trebuie să completeze, nu să înlocuiască sau să reproducă exact, experiența pe care o are un utilizator pe un desktop.

Când vine vorba de analiza mobilă, dezvoltatorii trebuie să abordeze zona limitată a „ecranului mic” ca un imobil prețios, o resursă limitată și, prin urmare, ar trebui să transmită doar informațiile cele mai critice. Orice încercare de a înghesui cantități mari de date pe un ecran mobil va îngreuna utilizatorilor să facă distincția între elemente și să proceseze rapid informațiile, ceea ce, la urma urmei, este, în primul rând, întregul scop al BI mobil. Acestea fiind spuse, dezvoltatorii pot utiliza tactici precum ascunderea anumitor date și comenzi, făcându-le vizibile numai în momentul în care este relevant pentru utilizator.

Luați în considerare o grilă de date care are 100 de coloane. S-ar putea să nu doriți să oferiți asta unui public mobil. În schimb, luați în considerare să le oferiți un mic fragment - doar informațiile importante într-un context mobil. Pentru a ascunde conținutul, utilizați ferestre pop-up și tăvi glisante. Acest lucru are avantajul de a accelera timpul de încărcare și, după cum știe orice dezvoltator, performanța slabă este un ucigaș pentru implicarea aplicației.

Este important să ne amintim că, deși dispozitivele mobile sunt puternice, ele nu sunt grozave pentru sarcinile generale de calcul. Cu toate acestea, excelează la regăsirea informațiilor direcționate care sprijină utilizatorul în context departe de computerul său. Când vine vorba de mobil, perfecțiunea aplicației se realizează atunci când dezvoltatorii creează aplicații care sunt conștiente de context și bogate din punct de vedere analitic, oferind informații puternice utilizatorilor lor finali.


10 capcane comune ale noilor antreprenori - și cum să le eviți

Un scafandru de stâncă sare în timp ce alții privesc din vârful stâncii la La Quebrada din Acapulco, Mexic, pe . [+] 17 mai 2012. Tradiția „La Quebrada” datează din 1934, când doi vecini din Acapulco s-au provocat să-și arate curajul și au decis să-și măsoare forțele aruncându-se în mare de pe vârful unei stânci. Rivalitatea dintre cei doi bărbați s-a încheiat mai întâi într-un spectacol nechibzuit, iar mai târziu într-un mod de a-și câștiga existența. S-a născut mitul „La Quebrada”, iar astăzi este aproape o religie pentru adepții săi. (Credit imagine: AFP/Getty Images prin @daylife)

Pornirea unei afaceri este destul de dificilă pentru cei neinițiați, iar ceea ce nu știi poate fi dezastruos. Majoritatea întreprinderilor mici eșuează în primii cinci ani, dar asta se întâmplă adesea din cauza unor greșeli ușor de evitat. Dacă intenționați să începeți o nouă afacere, în special una care se bazează pe servicii, iată câteva indicații care vă vor ajuta să evitați unele dintre cele mai comune capcane ale startup-ului:

    Folosește un contract. Oricine iti spune ca nu ai nevoie de contract se inseala. Înainte de a pune un minut de lucru, dezvăluie termenii acordului și pune-l pe hârtie. Contractele garantează că munca nu poate fi supusă unei scăderi a domeniului de aplicare -- acolo unde așteptările clienților depășesc cu mult bugetul -- și că aveți documentație legală dacă apar probleme atunci când este timpul să fiți plătit.

    – un serviciu de facturare online accesibil – o resursă pentru a vă maximiza deducerile fiscale cu un sistem organizat și pentru a afla ce deduceri puteți lua în limba engleză simplă – un serviciu de contabilitate online simplificat și sigur – contracte ușor de înțeles și care pot fi semnate online – o aplicație online „pretutindeni” pentru a capta și a accesa idei prin înregistrarea vocală, text, documente, scris de mână (iPad), tăiere web etc.

Construirea unei afaceri de succes începe cu un vis, dar fără cunoștințele și instrumentele necesare, se poate transforma într-un coșmar. Nu există niciun substitut pentru a-ți asuma responsabilitatea pentru propriul tău succes. Faceți pasul, dar verificați în prealabil adâncimea apei - și evitați capcanele de a începe o afacere știind mai întâi care sunt acestea.

Nick Reese este partenerul fondator al Microbrand Media, care este specializată în strategie digitală și marketing afiliat. De asemenea, lui Nick administrează și consiliază alte câteva companii și îi place să se conecteze cu alți antreprenori.

The Young Entrepreneur Council (YEC) este o organizație nonprofit, pe bază de invitație, formată din cei mai promițători tineri antreprenori din lume. YEC conduce #FixYoungAmerica, o mișcare bazată pe soluții care își propune să pună capăt șomajului în rândul tinerilor și să îi readucă pe tinerii americani la muncă.

Young Entrepreneur Council (YEC) este o organizație pe bază de invitație, cu taxă, formată din cei mai de succes antreprenori din lume cu vârsta de 45 de ani și mai puțin. Întrebări despre un…


Care sunt capcanele în managementul proiectelor?

Definiția capcanelor este destul de clară. Sunt orice lucruri sau procese care împiedică realizarea cu succes a proiectului dumneavoastră. Ele au natură diferită, dar în funcție de unele trăsături comune, aceste puncte problematice pot fi unite în grupuri.

1. Comunicare slabă

Numărul 1 punct în orice proiect. Aș spune și mai mult – comunicarea este forța motrice în marea majoritate a situațiilor care se întâmplă în lume. Este foarte important să aveți o discuție constantă cu fiecare membru. Astfel, un manager primește feedback continuu, actualizează colegii și pur și simplu arată că nu este un șef cu un stil de management dur, ci un lider care poate discuta chiar și despre emisiunea de ieri.

Modalități de îmbunătățire

Alegeți canalele de comunicare adecvate. Dacă creezi un chat într-un messenger, asigură-te că toți cei implicați sunt prezentați acolo. Sau dacă aveți nevoie să aveți o comunicare instantanee, nu scrieți e-mailuri, deoarece este consumator de timp și este ineficient pentru o conversație rapidă.

Nu uitați de conversație față în față. Țineți întâlniri în mod regulat și alegeți modul potrivit de a vorbi cu colegii dvs.

2. Lipsa de încredere și delegare

Un manager ar trebui să-și amintească că un proiect nu este doar despre el. Echipa lui este cea care îndeplinește și o mulțime de sarcini. Nu ar trebui să sune surprinzător, dar toți cei implicați într-un proiect sunt responsabili pentru el. Deci, este mai bine să nu iei toate sarcinile pentru tine cu un nivel minim de delegare. O astfel de manieră de management spune un singur lucru – un manager nu are încredere în colegii săi.

Modalități de îmbunătățire

Pentru a evita această capcană în managementul proiectelor, un manager poate delega sarcini unor oameni care vor face tot posibilul pentru a le îndeplini. În plus, încrederea și delegarea au un impact psihologic asupra participanților. Ele ridică moralul și toată lumea se simte ca parte a unei echipe și nu doar se simte într-un dispozitiv complicat.

Ascultă-ți oamenii și ia în considerare părerea lor.

3. Roluri, responsabilități și rezultate neclare

Pentru a fi conștienți de unde merge totul, fiecare trebuie să cunoască rolurile și responsabilitățile, precum și ceea ce se așteaptă la finalul unui proiect. Este necesar să fie totul clarificat de la bun început. Astfel echipele devin mai organizate și mai autogestionate.

Modalități de îmbunătățire

Țineți o întâlnire chiar de la început, unde vor fi stabilite toate așteptările și cursul general. Puneți toate informațiile critice într-o declarație privind scopul proiectului. Sunteți liber să vă referiți la acest document în orice etapă a proiectului când este nevoie să clarificați lucrurile și să nu lăsați totul să meargă în direcția greșită.

4. Un plan de proiect prost creat

Capcanele planificării în management includ și un plan de proiect sau, mai precis, unul prost creat.

Ce este un plan de proiect? Este un formal document în care sunt incluse toate deciziile cu domeniul de aplicare al proiectului și alte informații relevante. Un plan pregătit cu pricepere răspunde la toate întrebările despre un proiect, prin urmare, pregătirea acestuia necesită cunoștințe și abilități profunde din partea unui manager. Dar până la urmă evită capcanele inutile.

Modalități de îmbunătățire

Nici măcar nu încercați să gestionați proiecte fără un plan făcut în avans. Fiți conștienți de faptul că ar trebui să răspundă la următoarele întrebări: de ce?, ce?, cine? și atunci când?

Dacă ceva nu merge bine, poate duce la capcane și la scăderea domeniului de aplicare al proiectului, ceea ce implică schimbări necontrolate și creșterea domeniului de aplicare planificat inițial.

5. Lipsa defalcării proiectelor în sarcini mai mici

Proiectele sunt de obicei uriașe și pe termen lung. Probabil că veți fi de acord că, cu o sarcină intangibilă care se presupune că va fi terminată în câteva luni, este dificil să vă îndreptați spre muncă. Este momentul psihologic care este inerent ființelor umane.

Mod de îmbunătățire

Pentru a evita aceste capcane în managementul proiectelor, împărțiți toate lucrările în bucăți cu limite de timp clare pe termen scurt, obiective clare și instrumente pentru a le realiza. Astfel, creați o atmosferă în care membrii echipei se simt confortabil cu sarcinile gestionabile și limitele de timp. O sarcină care durează doar o săptămână sună mai bine decât un proiect de 3 luni, nu-i așa?

6. Management slab al resurselor

Resursele alcătuiesc și proiecte. Au natură diferită. Unele dintre ele sunt materiale precum echipamente. Unele dintre ele se referă la forța de muncă care este formată din toți membrii echipei. Alte resurse sunt bazate pe costuri.

Modalități de îmbunătățire

În ceea ce privește forța de muncă, este destul de ușor să eviți unul dintre capcanele comune în managementul proiectelor. Asigurați-vă că vă personalizați zilele lucrătoare în avans și în detalii. Luați în considerare toate zilele lucrătoare, zilele libere și vacanțele. Amintiți-vă, managementul resurselor este la fel de important ca orice altă activitate dintr-un proiect. Nu există niciun detaliu nesemnificativ în ea.

De asemenea, asigurați-vă că toate resursele sunt alocate în funcție de abilitățile lor. Realocați-le dacă este necesar.

7. Fără atenție la managementul oamenilor

Domeniul de aplicare al proiectului, costurile, livrabilele, termenele limită... prea mulți manageri blocați în ele, creând astfel un mediu pentru alte capcane ale proiectului. Pur și simplu uită de oamenii care fac de fapt toată munca. Managementul adecvat al echipei duce la o mai bună comunicare și înțelegere în cadrul unui proiect. Și invers, lipsa managementului oamenilor duce la îndeplinirea greșită a sarcinilor și la termenele limită ratate.

Mod de îmbunătățire

De fapt, acest punct este similar cu primul în care a fost descrisă comunicarea. Vorbește cu colegii tăi, reamintește-le tuturor cât de important este rolul său pentru realizarea cu succes a proiectului, fără capcane în managementul proiectului. Țineți întâlniri cu participanții echipei pentru ca toată lumea să aibă o imagine clară și pentru ca părțile interesate să ofere un management mai bun al părților interesate din proiect.

8. Managementul inadecvat al riscului

Poate suna surprinzător pentru cineva sau chiar descurajator, dar riscurile vor apărea, indiferent cât de perfect ar arăta totul la început. Riscurile sunt una dintre capcanele în managementul proiectelor, care este foarte probabil să se întâmple în orice etapă. Dar ceea ce poate face un manager este să aplice una dintre cele 10 abilități de management de proiect ale fiecărui manager de succes, să le prevadă și să fie pregătit pentru ele.

Modalități de îmbunătățire

Fă tot posibilul și calculează cât mai multe riscuri de la bun început. Împărtășește-ți ideile cu membrii echipei tale, raportează-le toate rezultatele calculelor tale și pregătește-le pentru fiecare situație, chiar și pentru cea mai proastă. Cu cât știu mai multe despre riscuri și despre modalitățile de a se comporta, cu atât este mai bine pentru întregul proiect.

9. Termene false sau nu realiste

Acesta este un punct despre psihologie. Sefii si managerii stabilesc de obicei termene false cu limite de timp aproape nerealiste care vor fi urmate de cele reale. Iată ce cred ei: este greu să respectați un termen fals, dar membrii echipei mele cred că acesta este unul real, ceea ce îi va face să facă tot posibilul pentru a îndeplini sarcinile. După aceea, realizând că mai există un interval de timp înainte de unul real, cu siguranță ar trebui să le termine la timp.

Modalități de îmbunătățire

Renunta la practica de a stabili termene limita false. Este o pantă alunecoasă. Odată ce colegii observă că un manager aderă la practica de a stabili termene false, ei pot înceta odată pentru totdeauna să creadă un manager. Este o capcană de proiect dificilă pe care fiecare lider ar trebui să o evite.

10. Neutilizarea sau utilizarea instrumentelor ineficiente de management al proiectelor

Un manager de proiect fără un instrument special este ca un vânător fără armă. Este aproape imposibil să vă amintiți și să gestionați totul, mai ales în mediul cu proiecte multiple.

Prin urmare, alegerea corectă a unui instrument este un punct crucial care vă ajută să uitați de multe capcane dificile. Software-ul GanttPRO Gantt Chart permite managerilor și membrilor echipei să țină evidența proiectului, să fie conștienți de datele de început și de sfârșit ale fiecărei sarcini, să aloce eficient resursele și pur și simplu să colaboreze cu membrii echipei sau părțile interesate.

Ați fost vreodată în situații în care capcanele descrise mai sus în managementul de proiect v-au stricat planurile? Probabil, ați fost într-o situație care nu a fost descrisă aici? Vă rugăm să ne împărtășiți comentariile dvs.!


Păstrați obiectivul la vedere

Pe măsură ce săpăm în capcanele CI/CD – complet cu toată terminologia sa ezoterică – este ușor să pierdem din vedere De ce asta conteaza. În cele din urmă, CI/CD este esențial deoarece îndeplinește obiectivele de afaceri.

Directorii de tehnologie știu că evoluția continuă, remediile rapide și rezultatele de calitate creează și păstrează clienții. Ei știu că o lansare eșuată invită o lovitură la recenziile din App Store și să recâștige recenzii ridicate este mai greu decât să le păstreze. Devops ar putea crea o experiență de lucru mai bună pentru echipa ta, dar nu de aceea companiile implementează devops.

Mai simplu spus, capcanele CI/CD merită revizuite, deoarece sunt în joc miliarde de dolari. Deși nu vă sugerez să adăugați un indicator de stoc sau un instrument de urmărire a recenziilor App Store în tabloul de bord CI/CD, vă îndemn să fiți la curent cu acest lucru. Multe depind de detaliile CI/CD.

Zubin Irani este co-fondator și CEO al cPrime, o consultanță cu servicii complete care implementează transformări agile și oferă soluții agile pentru mai mult de 50 de firme din Fortune 100 și mulți dintre cei mai mari angajatori din Silicon Valley.


Priveste filmarea: Capcana pentru veverite, sobolani si soareci Havahart 1025 (August 2022).